Raw-Blue 小鼠單核細(xì)胞白血病細(xì)胞
培養(yǎng)基和添加劑
DMEM高糖,+10%胎牛血清
傳代方法:
收到細(xì)胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況。
(一)如果細(xì)胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶**后放到超菌臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細(xì)胞已長滿,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶,細(xì)胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6傳代;2~3天1次。
。
注意:傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細(xì)胞不適應(yīng)而造
成生長不好。
凍存方法: 凍存液:基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
儲存:液氮儲存